快速分析柱制備和操作快速柱色譜:
1)確定干燥、不含溶劑的待分離混合物的重量。
2)用薄層色譜選取溶劑體系,使Rf的值處于0.2~0.3之間,但如果混合物復(fù)雜,這可能不現(xiàn)實(shí)。在比較復(fù)雜的情況下,可能需要借助梯度洗脫的方式,簡(jiǎn)單地說(shuō),就是在純化洗脫的過(guò)程中不斷提高溶劑的極性,該技術(shù)在后面有更加詳盡的介紹。但是在薄層色譜分析中,你必需確定哪種溶劑體系將會(huì)使不同的點(diǎn)樣處于Rf在0.2~0.3的范圍之內(nèi)。
3)確定用于樣品上柱的方法。你可有三種選擇:凈試樣法,溶液法或硅膠吸附法。
快速分析柱的構(gòu)造:
由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。
使用:
色譜柱在使用前,進(jìn)行柱的性能測(cè)試,并將結(jié)果保存起來(lái),作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同;另外,在做柱性能測(cè)試時(shí)是按照色譜柱出廠(chǎng)報(bào)告中的條件進(jìn)行,只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才有可比性。
要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn):
流動(dòng)相對(duì)樣品具有一定的溶解能力,保證樣品組分不會(huì)沉淀在柱中(或長(zhǎng)時(shí)間保留在柱中)。
流動(dòng)相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)(特殊情況除外)。
流動(dòng)相的黏度要盡量小,以便在使用較長(zhǎng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果;同時(shí)降低柱壓降,延長(zhǎng)液體泵的使用壽命(可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度)。
流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測(cè)器相適應(yīng)。
流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。
在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測(cè),還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。